纸电泳

原理

根据电泳现象在渗透了缓冲液的滤纸加上电场使物质移动的电泳法。也就是把样品以带状加在作为支持体的滤纸内来检测其移动和分离的方法。常用以分离性质相似的物质，如各种氨基酸的分离和稀土元素的分离等。

纸电泳的仪器装置包括电泳槽及电泳仪两大部分。 电泳槽是进行电泳的装置，其中包括铂电极（直径0.5——0.8cm）、缓冲液槽、电泳介质的支架和一个透明的罩。常见的电泳槽有水平式和悬架式等。电泳仪是提供直流电源的装置，它能控制电压和电流的输出。电泳槽内的铂电极经隔离导线穿过槽壁与外接电泳仪电源相连，电源为具有稳压器的直流电源。纸电泳可分为低压电泳和高压电泳两类。低压电泳的电压一般在100——500V，电流为 0——150 mA，高压电泳的电压一般在500——10 000V，50——400 mA。

（1） 电泳缓冲液 枸橼酸盐缓冲液（pH3.0） 取枸橼酸 （C6H8O7·H2O）39.04g与枸橼酸钠（C6H5Na3O7·2H2O）4.12g，加水4000ml，使溶解。

（2） 滤纸 取色谱滤纸置1mol/L甲酸溶液中浸泡过夜，次日取出，用水漂洗至洗液的pH值不低于4,置60℃烘箱烘干，备用。可按需要裁成长27cm、宽18cm的滤纸，或根据电泳室的大小裁剪，并在距长度方向一端5——8cm处划一起始线，每隔2.5——3cm处做一记号备点样用。

（3） 点样 有湿点法和干点法。湿点法是将裁好的滤纸全部浸入枸橼酸盐缓冲液（pH3.0）中，湿润后，取出，用滤纸吸干多余的缓冲液，置电泳槽架上，使起始线靠近阴极端，将滤纸两端浸入缓冲液中，然后用微量注射器精密点加供试品溶液，每点10μl,共3点，并留2个空白位置。 干点法是将供试品溶液点于滤纸上，吹干、再点，反复数次，直至点完规定量的供试品溶液，然后用喷雾器将滤纸喷湿，点样处最后喷湿，本法适用于稀的供试品溶液。

（4） 电泳 于电泳槽中加入适量电泳缓冲液，浸没铂电极，接通电泳仪稳压电源挡，调整电压梯度为18——20V/cm，电泳约1小时45分钟，取出，立即吹干，置紫外光灯（254nm）下检视，用铅笔划出紫色斑点的位置。

（5） 含量测定 剪下供试品斑点和与斑点位置面积相近的空白滤纸，剪成细条，分别置试管中，各精密加入0.01mol/L盐酸溶液5ml，摇匀，放置1小时，用3号垂熔玻璃漏斗滤过，也可用自然沉降或离心法倾取上清液，按各药品项下的规定测定吸收度，并按吸收系数计算含量。

纸电泳的设备简单，应用广泛，是最早使用的一种电泳技术。最初用于蛋白质，后来也用于氨基酸、核苷酸一些低分子物质，其优点在于或采用滤纸与色素结合的直接电泳图，或剪下滤纸的任何部分来抽提其中的物质。在早期的生物化学研究中，曾发挥重要作用。由于纸电泳时间长，分辨率较差，近年来逐渐为其他快速、简便、分辨率高的电泳技术所代替。