变性凝胶电泳

双链DNA分子在一般的聚丙烯酰胺凝胶电泳时，其迁移行为决定于其分子大小和电荷。不同长度的DN******段能够被区分开，但同样长度的DN******段在胶中的迁移行为一样，因此不能被区分。DGGE/TGGE技术在一般的聚丙烯酰胺凝胶基础上，加入了变性剂（尿素和甲酰胺）梯度，从而能够把同样长度但序列不同的DN******段区分开来。一个特定的DN******段有其特有的序列组成，其序列组成决定了其解链区域（meltingdomain,MD）和解链行为（meltingbehavior）。一个几百个碱基对的DN******段一般有几个解链区域，每个解链区域有一段连续的碱基对组成。当变性剂浓度逐渐增加达到其最低的解链区域浓度时，该区域这一段连续的碱基对发生解链。当浓度度再升高依次达到各其他解链区域浓度时，这些区域也依次发生解链。直到变性剂浓度达到最高的解链区域浓度后，最高的解链区域也发生解链，从而双链DNA完全解链。

不同的双链DN******段因为其序列组成不一样，所以其解链区域及各解链区域的解链浓度也是不一样的。当它们进行DGGE时，一开始变性剂浓度比较小，不能使双链DN******段最低的解链区域解链，此时DN******段的迁移行为和在一般的聚丙烯酰胺凝胶中一样。然而一旦DN******段迁移到一特定位置，其变性剂浓度刚好能使双链DN******段最低的解链区域解链时，双链DN******段最低的解链区域立即发生解链。部分解链的DN******段在胶中的迁移速率会急剧降低。因此，同样长度但序列不同的DN******段会在胶中不同位置处达到各自最低解链区域的解链浓度，因此它们会在胶中的不同位置处发生部分解链导致迁移速率大大下降，从而在胶中被区分开来。然而，一旦变性剂浓度达到DN******段最高的解链区域温度时，DN******段会完全解链，成为单链DNA分子，此时它们又能在胶中继续迁移。因此如果不同DN******段的序列差异发生在最高的解链区域时，这些片段就不能被区分开来。在DN******段的一端加入一段富含GC的DN******段（GC夹子，一般30-50个碱基对）可以解决这个问题。含有GC夹子的DN******段最高的解链区域在GC夹子这一段序列处，它的解链浓度很高，可以防止DN******段在DGGE胶中完全解链。当加了GC夹子后，DN******段中基本上每个碱基处的序列差异都能被区分开。