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对角线电泳

对角线电泳是双向电泳的一种特例。双向电泳将蛋白质样品点在凝胶的一个端点,走过电泳以后进行某种特殊处理,转过90°再进行第二次电泳。若两次电泳的缓冲液、电压等条件都一致,则此双向电泳即为对角线电泳。

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目前其主要作用是膜蛋白的分离鉴定,确定二硫键和蛋白质复合物的研究。

对角线电泳最经典的用途当属二硫键的确定:

样品蛋白质经硫氧还蛋白处理后,利用荧光巯基探针标记巯基,目标蛋白会带上荧光探针。再进行对角线电泳时,如果发现目标蛋白存在分子内二硫键,则经处理后所得的点位于对角线的上方;如果目标蛋白存在分子间二硫键,则经处理后得到的点位于对角线的下方。

同时对角线电泳有一定缺点:

(1)检测低丰度蛋白的敏感性不够;(2)一些分子量过大(>200 kDa)、极酸性或极碱性蛋白在电泳中会丢失;(3)高疏水性蛋白或不溶性蛋白得不到较好的检测;(4)重复性问题 

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